PCR实验室设计及建设要求

PCR实验指的是基因扩增实验，其特点是能将微量的DNA大幅增加，是分子生物学研究和实验的常规方法，PCR实验室广泛应用于生物学各个领域，例如：乙型肝炎，禽疫病、艾滋病检测，癌基因的检测和诊断，个体识别，DNA指纹，亲子鉴定及法医物证等等。SLD中检实验室技术就PCR实验室设计和建设要求逐一给大家解释：

一、PCR实验室布局

1、PCR实验室原则上分为：①试剂准备区；②样品制备区；③扩增区；④扩增产物分析区，共四个单独的工作区域。并设有专用走廊，各工作区域应设缓冲间，工作区与缓冲间宜安装连锁装置。

2、不同功能的工作区应是分隔独立的，各工作区有明显的标志，不能直通，如果紧密连接，需安装物品传递窗。

① 试剂准备区和样品制备区为扩增前区；

② 扩增区和扩增产物分析区为为扩增后区，即从：试剂准备区——样品制备区——PCR扩增室——产物分析室，不得逆向流动。

3、实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区，不得逆向流动。

4、各工作区的顶部应该安装紫外灯，紫外灯波长一般为254mm,配置要求为每20㎡一支40W的紫外灯。

二、实验室各区功能及主要设备

1、试剂准备区：

① 主要进行试剂的制备，分装和主反应混合液的制备。试剂盒用于样品制作的材料应直接运送至该区域。

② 试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的试剂。

③ 本区主要设备有冰箱，天平，离心机，加样器，振荡器等。

④ 本区对气流压力的控制，并没有严格的要求，一般为+10Pa。

2、样品制备区：

① 主要进行样品的保存，核酸提取，贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。

② 本区主要设备有冰箱，生物安全柜，离心机，加样器，振荡器等。

③ 本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染，压力一般设计为+10Pa。

3、扩增区：

① 主要进行DNA扩增项目。

② 已制备的DNA模板(来自样品制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂准备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。

③ 本区主要设备有：冰箱，加样器，离心机，扩增仪等。

④ 本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶从本区漏出，压力一般设计为-25Pa。

4、 扩增产物分析区：

① 主要进行扩增产物的测定。

② 本区主要设备有加样器，洗板机、酶标仪和水浴箱等。

③ 本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域，压力一般设计为-25Pa。

三、PCR实验室通风系统及压力控制

① 各区域之间应具备单间的实验工艺流、气流、物流与人流，形成单向流程的保护屏障。避免实验室之间的相互干扰，也防止气溶胶扩散对实验过程造成污染。

② PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式，严格控制送风、排风的比例，以保证整个实验区的压力要求。

四、PCR实验室装饰

① 实验室围护结构应牢固，气密性好;

② 所有阴阳角宜采用圆弧过度;

③ 墙体内壁光洁，不积尘、易清洗、易消毒、耐腐蚀;

④ 地面使用环氧树脂自流坪或PVC卷材，材料应满足光洁、耐腐蚀、无缝隙、无渗漏的基本要求。

五、PCR实验室注意事项

1、区域大小设置：样品制备区要放置生物安全柜和低温冰箱，空间应大一些。而试剂准备区，扩增区，扩增产物分析区，空间可以相对小一些。

2、应急装置配备：试剂准备区，样品制备区应设紧急洗眼器，以保证操作人员的安全。

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